双靶点CAR-T的脱靶检测可以采用多种方法，包括MPA试验、组织交叉反应（TCR）和体外细胞杀伤试验等。以MPA试验为例，其检测过程需要根据双CAR的结构策略来进行抗体的合成和开展MPA试验。总体原则是合成的、用于MPA检测的抗体结构要尽量反映T细胞表面表达的CAR的真实结构。例如，如果双CAR是串联在一起的，即它们形成了一个二价串联抗原识别结构，那么可以合成一个类似的二价串联抗体进行MPA检测，来评估CAR-T对不同抗原的特异性结合能力，从而判断其是否存在脱靶效应。如果双CAR是分开的，那么需要分别针对每个靶点，合成含有CAR结构的抗体，然后进行两个独立的MPA检测。

首先应采用多种体外方法（MPA、TCR、体外细胞杀伤）来评估CAR-T的脱靶毒性，考虑到各种方法的周期、便捷性和费用，同时又能及早的发现CAR-T的脱靶毒性，建议在CAR的早期筛选阶段先采用不同细胞株的体外杀伤检测，来确定候选CAR。针对筛选确定的候选CAR，建议在开展首次人体试验前进行MPA检测和人体冰冻组织交叉反应试验。